Kromasil色谱柱的使用与维护
色谱柱安装与平衡
使用经过滤并脱气的流动相(不含任何缓冲液)*冲洗HPLC泵和管线，确保系统中没有气泡。按照流向标签(位于色谱柱上)指示的方向将色谱柱一端连接至进样器，另一端不接检测器。将泵流速设置为0.1 mL/min(或系统允许zui低设置)并在5分钟内增大至正常流速。
当色谱柱出口处有溶剂自由流出时停止泵送，擦拭出口端并将其连接到检测器。
以正常流速和约10-30倍色谱柱体积的流动相来平衡色谱柱。
检测柱效
强烈建议用户在收到Kromasil原装jin口色谱柱15天内进行柱效检测，并在整个使用周期内，
进行定期的柱效测试，以便随时监测色谱柱的寿命情况。
运行参数
5μm及3.5μm色谱柱最大耐受压力400 Bar，2.5μm及1.8μm色谱柱最大耐受压力1000 bar。最高工作温度不高于60℃。在使用Kromasil Classic系列C18，C8，C4，Phenyl
色谱柱时，流动相pH控制在1.5-9.5之间，这样有利于延长色谱柱的使用寿命。
流动相的配置
仅使用HPLC色谱纯溶剂、水、最高纯度的化学品和试剂。
使用前对所有流动相进行过滤和脱气。
确保溶剂可互溶。
色谱柱的保存
色谱柱使用完毕后，应尽可能地冲洗掉残留在色谱柱内的杂质和沉积物。保存在适合的储存溶剂中，储存溶剂可以参考COA中建议使用溶剂。储存环境需保持温度稳定、避光，并注意检查Peek堵头，防止松动导致柱内溶剂流失。
色谱柱的清洗
柱压升高，保留时间变化和柱效降低都是色谱柱被污染的表现。
多数情况下，通过正确的冲洗能够解决上述问题。我们需要谨记的是越早冲洗或再生越会更容易的解决上述问题。
通常具有较强吸附的杂质都集中在色谱柱进口一端，zui简单的方法是对色谱柱进行反冲。反冲的方法只对填装紧密的色谱柱有效，柱性能也不会发生变化。
反冲时，请按照下述的一般步骤，使用特定溶剂对色谱柱进行清洗，并根据不同厂商的建议进行，以免损坏色谱柱。
反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl) |
未键合的硅胶柱(SIL) |
使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗 a.水:乙腈=95:5 b.四氢呋喃 c.乙腈:水=95:5 d.不含盐的流动相 e.流动相 |
使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗 a.异丙醇 b.甲醇 c.乙酸乙酯 d.流动相 |
键合正相柱(CN, Diol) |
用于蛋白/多肽分析的反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl) |
使用10倍柱体积的如下溶剂依次清洗 a.三氯jia烷 b.异丙醇 c.二氯甲烷 d.流动相 |
a.使用20倍柱体积的不含盐流动相进行清洗 b.梯度清洗 流动相A: 0.1%TFA水溶液:乙腈=95 : 5流动相B: 0.1%TFA乙腈:异丙醇=1 : 2 在30 min内，B相从25%升至100%进行清洗，运行2个梯度程序。 c.流动相平衡，切勿将色谱柱保存在TFA中 |
反冲时，请将流动相流速将至正常流速的1/10-1/5,并断开检测器。反冲时，请将流动相流速将至正常流速的1/10-1/5,并断开检测器。
Kromasil保护柱
色谱柱一旦污染，冲洗过程将非常耗时，建议使用保护柱减少对色谱柱的污染，
Kromasil保护柱:
•与Kromasil色谱柱具有相同的填料，*佳保护色谱柱，同时不影响分析结果。
•柱芯柱套式设计，成本低。
部分常规保护柱订货信息
货号 |
描述 |
00000HHO |
2.1-4.6 mm guard holder |
00000KCO |
2.1-21.2 mm guard coupler |
M05CLNGC |
Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
M05CLNSK |
Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit |
M05CMNGC |
Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
M05CMNSK |
Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit |
M05CSNGC |
Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
M05CSNSK |
Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit |
M05NHNGC |
Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
M05NHNSK |
Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit |
M05PHNGC |
Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack) |
M05PHNSK |
Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit |
S05CNNGC |
Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack) |
S05CNNSK |
Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit |
M05SINGC |
Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
M05SINSK |
Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit |
S05DINGC |
Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack) |
S05DINSK |
Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit |
