GB 23200.69-2016食品安全国家标准
食品中二硝基苯胺类农药残留量的测定
液相色谱-质谱_质谱法
前言
本标准代替SN/T 2795-2011《进出口食品中二硝基苯胺类农药残留量的测定液相色谱—质谱/串联质谱法》。
本标准与SN/T 2795-2011相比，主要变化如下：
—标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；
—标准名称和范围中“进出口食品"改为“食品"；
—标准范围中增加“其它食品可参照执行"。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
—SN/T 2795-2011。
1范围
本标准规定了食品中8种二硝基苯胺类农药残留量的液相色谱-质谱/质谱法检测方法。
本标准适用于黄豆、大米、菠菜、生姜、苹果、西瓜、甘蓝、节瓜、茶叶、鸡蛋、猪肉和鸡肝中氟乐灵、二甲戊灵、氨磺乐灵、仲丁灵、氨氟乐灵、氨氟灵、甲磺乐灵和异丙乐灵等二硝基苯胺类农药残留量的测定和确证；其它食品可参照执行。
2规范性引用文件
文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改dan）适用于本文件。
GB 2763食品安全国家标准食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样用乙腈振荡提取，石墨化碳黑固相萃取柱和HLB固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法仪测定和确证，外标法定量。
4试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。
4.1试剂
4.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。
4.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。
4.1.3正己烷(C6H14)：色谱纯。
4.1.4甲酸（CH2O2）：色谱纯。
4.1.5丙酮（C3H6O）：优级纯。
4.1.6氯化钠（Nacl）：分析纯。
4.1.7无水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯，用前经650℃灼烧4 h，置干燥器中备用。
4.2溶液配制
4.2.1乙腈-水溶液（1+1，含0.05%甲酸）：量取500 mL乙腈与0.5 mL甲酸于1 L容量瓶中，用水定容至1 L，混匀。
4.2.2正己烷-丙酮溶液（2+8）：取20 mL正己烷，加入80 mL丙酮，混匀。
4.3标准品
4.3.1二硝基苯胺类农药标准物质：参见附录A中表A.1。
4.4标准溶液配制
4.4.1二硝基苯胺类农药标准储备溶液：分别准确称取适量的二硝基苯胺类农药标准物质，用丙酮配制成浓度为1000 mg/L的标准储备溶液，标准溶液避光于-18℃保存，保存期为12个月。
4.4.2二硝基苯胺类农药混合中间标准溶液：吸取适量的各标准储备溶液，用甲醇稀释成氟乐灵浓度为5.0mg/L，其它7种药物浓度为1.0 mg/L的混合中间标准溶液，0℃~4℃避光保存，保存期为3个月。
4.4.3基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合中间标准溶液，用空白样品提取液配成氟乐灵浓度为0μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L、250μg/L、500 μg/L和1000 μg/L，其它7种农药浓度为0μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L和200 μg/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。
4.5材料
4.5.1石墨化碳黑固相萃取柱：3 mL 250 mg，或相当者。用前3 mL正己烷-丙酮溶液活化，保持柱体湿润。
4.5.2 OasisHLB，6mL，200mg，或相当者。使用前用5 mL乙腈活化，保持柱体湿润。
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。
5.2分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。
5.3粉碎机。
5.4组织捣碎机。
5.5涡旋混匀器。
5.6固相萃取装置，带真空泵。
5.7氮吹浓缩仪。
5.8离心机：转速不低于5 000 r/min。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1黄豆、茶叶和大米
取代表性样品约500 g，（不可用水洗）切碎后，用捣碎机将样品加工成浆状，混匀。试样均分为二份，装入洁净容器，密封，并标明标记。
6.1.2蔬菜、水果、鸡蛋、猪肉及鸡肝
取代表性样品约500 g，（不可用水洗）切碎后，用捣碎机将样品加工成浆状，混匀。试样均分为二份，装入洁净容器，密封，并标明标记。
注：以上样品取样部位按GB 2763附录A执行。
6.2试样保存
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。黄豆、茶叶和大米试样于常温下保存。蔬菜、水果、鸡蛋、猪肉及鸡肝试样于-18C以下冷冻存放。
7分析步骤
7.1提取
7.1.1黄豆、大米、茶叶、鸡蛋、猪肉及鸡肝
对于茶叶、大豆、板栗、玉米样品，称取2.5 g试样（精确至0.01 g）。对于菠菜、蘑菇、苹果、牛肉、牛肝、鸡肉、鱼肉、牛奶样品，称取5 g试样（精确至0.01 g）。将称取的试样置于50 mL离心管中，加入6 mL饱和氯化钠水溶液，于涡旋混匀器上混匀30 s，放置15 min。加入6 mL丙酮-正己烷溶液，在混匀器上混匀2 min。5 000 r/min离心1 min，吸取上层提取液于另一试管中。再分别加入4 mL丙酮-正己烷溶液重复提取两次，合并提取液，在45℃下氮气流吹至约1 mL待净化。
7.1.2蔬菜、水果
称取约5g（精确至0.01 g）样品于50 mL具塞离心管中，然后加入2 g氯化钠，再加入15 mL乙腈高速均质提取3 min，于5 000 r/min离心5 min，将乙腈层转移至25 mL容量瓶中。残渣再用10 mL乙腈重复提取一次，合并提取液，并用乙腈定容至25 mL。
7.2净化
7.2.1黄豆、大米、猪肉
吸取全部浓缩提取液于Supelclean C18固相萃取柱中，以约1.5 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用5 mL乙腈淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于1.5 mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，残渣用乙腈+水溶液定容至1.0 mL。旋涡混匀后，过微孔滤膜，供液相色谱－质谱/质谱仪测定。
7.2.2蔬菜、水果
精确吸取5 mL提取液5.0 mL于15 mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，用2.0 mL正己烷-丙酮溶液溶解，转入Envi-carb固相萃取柱中，以约1.5 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用3 mL正己烷-丙酮溶液淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15 mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，残渣用乙腈+水溶液定容至1.0 mL。旋涡混匀后，过微孔滤膜供液相色谱－质谱/质谱仪测定。
7.2.3茶叶、鸡蛋及鸡肝
吸取茶叶、鸡蛋及鸡肝浓缩提取液于Oasis HLB固相萃取柱中，以约1.5 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用5 mL乙腈淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15 mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，用2.0 mL正己烷-丙酮溶液溶解，转入Envi-carb固相萃取柱中，以约1.5 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，再用3 mL正己烷-丙酮溶液淋洗并抽干固相萃取柱，收集全部流出液于15 mL离心管中，40℃以下用氮气吹至近干，残渣用乙腈+水溶液定容至1.0 mL。旋涡混匀后，过微孔滤膜，供液相色谱－质谱/质谱仪测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
a)色谱柱：C18色谱柱，50 mm×2.1 mm (i.d.），1.7 d.，或相当者；
b)柱温：40℃；
c)进样量：10μL；
d)流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。
表1流动相、流速及梯度洗脱条件
7.3.2质谱参考条件
a)离子化模式：电喷雾离子源；
b)扫描方式：正离子扫描；
c)检测方式：多反应监测（MRM）；
d)分辨率：单位分辨率；
其它参考质谱条件见附录B。
7.3.3定性测定
每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
表2使用液相色谱-串联质谱法定性时相对离子丰度最大容许误差
7.3.4定量测定
仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液中待测物的响应值均应在测定方法的线性范围内，如果超出线性响应范围，应用空白基质溶液进行适当稀释。在上述液相色谱－质谱条件下，二硝基苯胺类农药的保留时间分别为：氨磺乐灵（3.21 min）、甲磺乐灵（3.41 min）、氨氟灵（4.06 min）、氨氟乐灵（5.20 min）、二甲戊灵（5.36 min）、仲丁灵（5.70 min）、氟乐灵（5.70 min）和异丙乐灵（6.06 min）。标准品的液相色谱－质谱/质谱多反应监测色谱图见附录C中的图C.1。
7.4空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
8结果计算和表述
用色谱数据处理机或按下式（1）计算试样中各二硝基苯胺类农药的含量：
式中：
X——试样中各二硝基苯胺类农药的残留含量，单位为毫克每千克，mg/kg；
Ai——样液中各二硝基苯胺类农药的峰面积；
V——样液最终定容体积，单位为毫升，mL；
Asi——标准工作液中各二硝基苯胺类农药的峰面积；
Csi——标准工作液中各二硝基苯胺类农药的浓度，单位为微克每毫升，μg/mL；
m——最终样液所代表的试样量，单位为克，g。
注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
9精密度
9.1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
9.2在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录F的要求。
10定量限和回收率
10.1定量限
本方法二硝基苯胺类农药定量限均为0.01 mg/kg。
10.2回收率
当添加水平为0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg时，二硝基苯胺类农药的添加回收率参见附录D。
