GB 23200.120-2021 食品安全国家标准
植物源性食品中甜菜安残留量的测定
液相色谱—质谱联用法
前言
本文件按照GB/T 1.1- 2020《 标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件系国内shou次发布。
1范围
本文件规定了植物源性食品中甜菜安残留量的液相色谱质谱联用测定方法。
本文件适用于植物源性食品中甜菜安残留量的定量测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不ke少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改dan）适用于本文件。
GB 2763- 2021 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中甜菜安用乙腈提取，经乙二胺-N-丙基硅院化硅胶（PSA）和石墨化炭黑（GCB）分散固相萃取净化，其中，茶叶和香辛料（调味料）样品使用活性炭/氨基复合固相萃取柱（Carb/NH2净化，液相色谱质谱联用法测定，外标法定。
4试剂与材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GBT 6682规定的一级水!
4.1试剂
4.1.1乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）色谱纯。
4.1.2氯化钠（Na2Cl.CAS号：7647-14-5 ）
4.1.3乙酸铵（CH3COONH4，CAS号631-61-8）
4. 1.4甲苯（C7H8，CAS号：108-88-3）
4.2溶液配制
4.2. 1乙酸铵溶液（10 mmol/L）：称取0.771 g乙酸铵（4.1.3）加水溶解，用水定容至1 L，混匀。
4.2.2 洗脱液A[乙腈甲苯溶液（3+1，体积比）]：取100 mL甲苯（4.1.4）加人300 mL乙腈（4.1.1）中，混匀。
4.2.3 洗脱液B[乙腊甲苯溶液（1+ 1，体积比）]：取250 mL甲苯（4. 1. 4）加入250 mL乙腈（4. 1.1）中，混匀。
4.3标准品
甜菜安（C16 H16N2O4 ，CAS号：13684-56-5）：标准品纯度建议≥95%，或合适数值。
4.4标准溶液配制
4.4.1甜菜安标准储备溶液（1000 mg/L）：准确称取100 mg（精确至0.1 mg）甜菜安标准品于50 mL烧杯中，用乙腈（4.1.1）溶解后转移到100 ml玻璃容量瓶中，定容至刻度，混匀，-18 ℃以下保存，有效期6个月。
4.4.2甜菜安标准工作溶液（10 mg/L）：准确吸取1 mI，甜菜安标准储备溶液（4.4.1）于100 mL玻璃容量瓶中，用乙腈（4.1.1）稀释至刻度，混匀，0℃~4 ℃保存，有效期1个月。
4.5材料
4.5.1有机滤膜：0. 22 μm。
4.5.2乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40μm~60μm。
4.5.3石墨化炭黑（GCB）：40 μm~ 120 μm。
4.5.4活性炭/ 氨基复合固相萃取柱（Carb/NH2） ：500 mg/500 mg，6 mL。
5仪器设备
5.1 液相色谱质谱联用仪：配有ESI离子源。
5.2 分析天平：感量0.1 mg和感量0.01 g。
5.3组织捣碎机。
5.4涡旋振荡仪。
5.5 离心机：转速不低于3 800 r/ min。
5.6高速离心机：转速不低于10 000 r/min。
5.7旋转蒸发仪。
5.8固相萃取装置。
6试样制备
6.1制备
样品测定部位按照GB 2763- 2021 中附录A的规定执行。食用菌、热带和亚热带水果（皮可食）随机取样1 kg，水生蔬菜、茎菜类蔬菜、豆类蔬菜、核果类水果、热带和亚热带水果（皮不可食）随机取样2 kg，瓜类蔬菜和水果取4个~6个个体（取样量不少于1 kg），其他蔬菜和水果随机取样3 kg。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取一部分或全部用组织捣碎机捣碎成匀浆，放人聚乙烯瓶中。
干制蔬菜、水果和食用菌随机取样500g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。谷类随机取样500g.粉碎后使其全部可通过425μm的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。
油料、茶叶、坚果和香辛料（调味料）随机取样500g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。
植物油类搅拌均匀，放入聚乙烯瓶中。
6.2储存
试样应于温度为-18℃及以下条件保存。
7分析步骤
7.1 提取
7.1.1 蔬菜、水果和食用菌
称取10 g（精确至0.01 g）试样于50 mL聚丙烯离心管中，加入30 mL乙腈（4.1. 1），涡旋振荡提取5 min，加入2 g氯化钠（4.1.2）涡旋2 min后，不低于3 800 r/min离心5 min，取上清液15 mL转移至100 mL鸡心瓶，45 ℃旋转蒸发至近干，加入1 mL乙腈（4.1. 1）落解。
7.1.2谷物、油料、坚果和植物油
称取5 g（精确至0. 01 g）试样于50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL水静置30 min后再加入10 mL乙睛（4.1.1），涡旋振荡提取5 min，加入2 g氯化钠（4.1.2）涡旋2 min后，不低于3 800 r/min离心5 min，取上清液5 mL转移至100 mL鸡心瓶，45℃旋转蒸发至近干，加入1 mL乙睛（4.1. 1）溶解。
7.1.3茶叶和香辛料（ 调味料）
称取2g（精确至0.01g）试样于50mL聚丙烯离心管中。加入10mL水静置30min后再加入10mL乙睛（4.1. 1） ，涡旋振荡提取5 min，加入2 g氯化钠（4.1.2）涡旋2 min后，不低于3 800 r/min离心5 min，取上清液5 mL转移至100 mL鸡心瓶，45℃旋转蒸发至近干，加入1 mL乙腈（4.1. 1）溶解。
7.2 净化
7.2.1蔬菜 、水果、食用菌、谷物、油料、坚果和植物油
将浓缩液移至装有50 mg PSA（4. 5. 2）和20 mg GCB（4. 5. 3）的2 mL离心管中[韭菜净化剂为100mg PSA（4. 5.2）和40 mg GCB（4.5. 3）]，涡旋3 min 后，10 000 r/min 离心1 min，经0.22 μm有机滤膜（4. 5.1）过滤，待液相质谱联用仪检测。
7.2.2茶叶和香辛料（调味料）
固相萃取柱（4.5. 4）用5 mL洗脱液A（4.2.2>活化，加入待净化的浓缩液，茶叶用10 mL洗脱液B（4. 2.3），香辛料（调味料）使用10 ml洗脱液A（4. 2. 2）洗脱。收集洗脱液于100 ml，鸡心瓶中，45 ℃下浓缩至近干，用1 mL乙腈（4.1.1）溶解，将溶解液转移至装有50 mg PSA（4. 5.2）和20 mg GCB（4.5. 3）的2mL离心管中二次净化，涡旋3min后，10000r/min离心1min，取上清液经0.22μm有机滤膜（4.5. 1）过滤.待液相色谱质谱联用仪检测。
7.3 测定
7.3.1仪器参考条件
a） 色谱柱：C18色谱柱，50 mmX2.1 mm（内径） ，粒径3 μm，或相当者；
b） 流动相：乙腈（4.1.1）-乙酸铵溶液（4.2. 1）= 80+20（体积比）；
c） 梯度洗脱条件：等度洗脱；
d） 流速：0.3 mL/ min；
e） 进样体积：5μL；
f） 离子源：电喷雾离子源；
g）电离模式：正离子模式；
h） 干燥气：氮气；
i） 柱温：25℃；
j） 干燥气流速：8.0 L/min；
k） 雾化器压力：241.3 kPa；
l） 毛细管电压：4.0 kV；
m） 监测模式：多反应监测；
n） 离子对监测条件：监测条件应符合表1的规定。
表1离子对多反应监测（MRM）条件
7.3.2标准工作曲线
将标准工作液（4.4.2）用相应空白基质提取液（7.2）逐级稀释得到质量浓度分别为0.025 mg/L、0. 05mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L和1 mg/L的基质标准溶液，质量浓度由低至高依次进样测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得到标准曲线回归方程。标准溶液色谱图可参照附录A。
7.4 定性及定量
7.4.1 保留时间
被测试样中甜菜安色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±2.5%之内。
7. 4.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比
在相同实验条件下进行样品测定时，检出色谱峰保留时间与标准样品一致，且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物质谱定量和定性离子均出现，且同一检测批次，对同一化合物，样品中日标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比，允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在甜菜安。
表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
单位为百分号
相对离子丰度 | ＞50 | 20~50 | 10~20 | ≤10 |
允许相对偏差 | ±20 | ±25 | ±30 | ±50 |
7.4.3测定
将基质标准溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。
7.5 空白试验
不加试样或仅加空白试样的空白试验，除不加试料外，应采用*相同的测定步骤进行平行操作。
8结果计算
试料中的甜菜安含量以质量分数ω计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或公式（2）计算。
式中：
A——样品溶液中甜菜安的峰面积；
As——标准溶液中甜菜安的峰面积；
ρ——标准客液中甜菜安质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；
ρX——从基质匹配标准工作曲线中得到的试样溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；
V1——提取溶剂总体积的数值，单位为毫升（mL）；
V2——吸取出用于浓缩用的提取溶液体积的数值，单位为毫升（mL）；
V3——样品溶液定各体积的数值单位为毫升（mL）；
m——试料质量的数值，单位为克（g）。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字，当结果大于1 mg/kg时保留3位有效数字。
9精密度
9.1在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差值不应大于重复性限（r），重复性限（r）的数据如下：
a） 含量为0.01 mg/kg时，重复性限（r）为0.0042；
b） 含量为0. 02 mg/kg时，重复性限（r）为0. 0067；
c） 含量为0. 05 mg/kg时，重复性限（r）为0.0120；
d）含量为0.1 mg/kg时，重复性限（r）为0. 0300；
e） 含量为0.5 mg/kg时.重复性限（r）为0. 0700。
9.2在再现性条件下，2次独立测定结果的绝对差值不应大于再现性限（R），再现性限（R）的数据如下：
a） 含量为0.01 mg/kg时，再现性限（R）为0.0047；
b）含量为 0.02 mg/ kg时，再现性限（R）为0.0110；
c）含量为 0.05 mg/kg时，再现性限（R）为0.0250；
d） 含量为0.1 mg/kg时，再现性限（R）为0.0510；
e） 含量为0.5 mg/kg时，再现性限（R）为0. 1900。
10 定量限
本文件方法茶叶、韭菜和香辛料（调味料）基质甜菜安方法定量限为0.05mg/kg，其他基质甜菜安的定量限为0. 01 mg/kg。
