GB 23200.11-2016 食品安全国家标准
桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农
药及相关化学品残留量的测定
液相色谱-质谱法
前言
本标准代替GB/T 23201-2008 《桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》。
本标准与GB/T 23201-2008相比，主要变化如下：
——标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；
——标准范围中增加“其它食品可参照执行"。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——GB/T 23201-2008。
1 范围
本标准规定了桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品（参见附录A和附录E）残留量液相色谱-质谱测定方法。
本标准适用于桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定，其它食品可参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，固相萃取柱净化，用乙腈-甲苯溶液(3+1)洗脱农药及相关化学品，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4 试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 试剂
4.1.1乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱纯。
4.1.2甲苯（C7H8，108-88-3）：色谱纯。
4.1.3甲醇（CH3OH，67-56-1/170082-17-4）：色谱纯。
4.1.4环己烷（C6H12，110-82-7）：色谱纯。
4.1.5异辛烷（C8H18，540-84-1）：色谱纯。
4.1.6氯化钠（NaCl，7647-14-5）：。
4.1.7无水硫酸钠（Na2SO4，7757-82-6）：650℃灼烧4h，贮于干燥器中，冷却后备用。
4.2标准品
农药及相关化学品标准物质：纯度≥95%，参见附录A。
4.3 标准溶液配制
4.3.1标准储备溶液
分别称取适量(精确至0.1mg)农药及相关化学品标准物于10mL容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇、甲苯、环己烷或异辛烷等溶剂溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录A)。标准储备溶液避光0℃~4℃保存，保存期为一年。
4.3.2混合标准溶液（混合标准溶液A、B、C、D、E、F和G）
按照农药及相关化学品的性质和保留时间，将413种农药及相关化学品分成A、B、C、D、E、F和G七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对413种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度(参见附录A)。
依据每种农药及相关化学品的分组、混合标准溶液浓度及其标准储备溶液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光0℃~4℃
保存，保存期为一个月。
4.3.3基质混合标准工作溶液
农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液A、B、C、D、E、F和G，用于做标准工作曲线。
基质混合标准工作溶液应现用现配。
4.4材料
4.4.1 Cleanert TPH柱：10mL 2.0g，或相当者。
4.4.2 微孔过滤膜(尼龙)：13mm×0.2μm。
5 仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。
5.2 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。
5.3 均质器：最大转速为24000 r/min。
5.4 离心机：最大转速为4200 r/min。
5.5旋转蒸发器。
5.6 鸡心瓶：150 mL。
5.7 移液器：1 mL。
5.8具塞离心管：50 mL。
5.9 样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。
5.10氮气吹干仪。
6 试样制备
将桑枝、金银花和荷叶三种中草药研磨成细粉，样品全部过425μm的标准网筛，混匀，制备好的试样均分成两份，装入清洁容器内，密封后，标明标记。枸杞可直接使用。
7 分析步骤
7.1 提取
分别称取金银花、枸杞子、荷叶和桑枝试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入15mL乙腈(枸杞子试样需再加入5mL水)，15000 r/min匀浆提取1min，加入2g氯化钠，再匀浆提取1min，4200 r/min离心5min，取全部上清液于150 mL鸡心瓶中，在离心管中再加入15mL乙腈，重复匀浆提取1min，4200r/min离心5min，取全部上清液与之前的提取液合并，于40℃水浴旋转蒸发至1 mL~2mL，待净化。
7.2 净化
在Cleanert TPH柱上加入约2cm高无水硫酸钠，置于固定架上。加样前先用10mL乙腈-甲苯溶液预洗柱，当预洗液液面到达无水硫酸钠的顶部时，迅速将上述样品浓缩液移入柱中，并用鸡心瓶接收淋出液。分别用2mL乙腈-甲苯溶液洗涤鸡心瓶两次，洗涤液也同样转入柱中，柱上连接25mL贮液器，用25mL乙腈-甲苯溶液洗脱农药及相关化学品，洗脱液于40℃水浴中旋转浓缩至1 mL~2 mL，将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，加入1mL的乙腈-水溶液，混匀，0.2µm滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱-串联质谱条件
7.3.1.1 A、B、C、D、E、F组LC-MS-MS测定条件(ESI正离子源)
a) 色谱柱：ZORBOX SB-C18，3.5μm，100mm×2.1mm(内径)或相当者；
b) 流动相及梯度洗脱条件见表1；
c) 柱温：40℃；
d) 进样量：10μL；
e) 离子源：ESI；
f) 扫描方式：正离子扫描；
g) 检测方式：多反应监测；
h) 离子喷雾电压：4000V；
i) 雾化气压力：0.28MPa；
j) 干燥气温度：350℃；
k) 干燥气流速：10L/min；
l) 监测离子对，碰撞能量和源内碎裂电压参见附录B。
7.3.1.2 G组LC-MS-MS测定条件(ESI负离子源)
a) 色谱柱：ZORBOX SB-C18，3.5μm，100mm×2.1mm(内径)或相当者；
b) 流动相及梯度洗脱条件见表2；
c) 柱温：40℃；
d) 进样量：10μL；
e) 离子源：ESI；
f) 扫描方式：负离子扫描；
g) 检测方式：多反应监测；
h) 离子喷雾电压：4000V；
i) 雾化气压力：0.28 MPa；
j) 干燥气温度：350℃；
k) 干燥气流速：10L/min；
l) 监测离子对，碰撞能量和源内碎裂电压参见附录B。
7.3.2 定性测定
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度＞50％，允许±20％偏差；相对丰度＞20％至50％，允许±25％偏差；相对丰度＞10％至20％，允许±30％偏差；相对丰度≤10％，允许±50％偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。
7.3.3 定量测定
本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线。并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。413种农药及相关化学品多反应监测（MRM）色谱图，参见附录C。
7.4 平行试验
按以上步骤对同一试样进行平行试验。
7.5 空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
8 结果计算和表述
液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式（1）计算：
式中：
Xi——试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
ci——从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
V——样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；
m——样品溶液所代表试样的重量，单位为克（g）。
计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。
9 精密度
9.1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。
9.2在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
10 定量限和回收率
10.1 定量限
本方法的定量限见附录A。
10.2 回收率
当添加水平为L0Q、4×LOQ 时,添加回收率参见附录F。
