GB 31656.9-2021食品安全国家标准
水产品中二甲戊灵残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件系首ci发布。
1范围
本文件规定了水产品中二甲戊灵残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于鱼虾、蟹、贝、海参、龟鳖类可食性组织中二甲戊灵残留量的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不ke少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件,不注日期的引用文件,其最新版本包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 30891-2014水产品抽样规范
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样中残留的二甲戊灵经乙晴提取,HLB固相萃取柱净化,C18吸附剂去除脂类杂质,液相色谱串联-质谱法测定,内标法定量。
5试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯。水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1试剂
5.1.1乙腈(C2H3N):色谱纯。
5. 1.2甲醇(CH4O):色谱纯。
5.1.3甲酸(CH2O2):色谱纯。
5. 1.4正已烷(C6H14):色谱纯。
5.1.5丙酮(C3H6O):色谱纯。
5. 1.6氯化钠(NaCI)。
5.2溶液配制
5.2.1正己烷-丙酮溶液:取正已烷500 mL、丙酮500 mL,混匀。
5.2.2甲酸水溶液(0.1%):取甲酸1 mL,用水稀释至1 000 mL。
5.3标准品
5.3. 1二甲戊灵(Pendimethalin,C13H19N3O4,CAS号:40487- 42-1),含量≥98.0%。
5.3.2氘代二甲戊灵(Pendimethalin-D5,C13H14N3O4D5,CAS号:1219803-39-0),含量≥98.0%。
5.4标准溶液配制
5.4.1标准储备液(1 mg/ mL):取二甲戊灵标准品约10 mg,精密称定,用乙腈溶解并稀释定容至10 ml容量瓶,摇匀,即得。4℃避光保存,有效期6个月。
5.4.2内标储备液(1 mg/mL):取氘代二甲戊灵标准品约10 mg,精密称定,用乙溶解并稀释定容至10 mL容量瓶,摇匀,即得。4℃避光保存,有效期6个月。
5.4.3标准中间液(1μg/ mL):准确移取二甲戊灵标准储备液0.1 mL,于100 mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为1μg/ml的标准中间液。4℃下避光保存,有效期2周。
5.4.4内标中间液(1μg/mL):准确移取氘代二甲戊灵标准储备液0.1 mL,于100 mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成浓度为1μg/mL.的内标中间液。4℃下避光保存,有效期2周。
5.5材料
5.5.1开云app安装 。
5.5.2C18吸附剂:40μm~60μm。
5.5.3微孔滤膜:0.22μm,耐有机试剂。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI源)。
6.2分析天平:感量0.01 g和0.00001 g。
6.3氮吹仪。
6.4均质机。
6.5涡旋混合器。
6.6离心机:10000 r/min或以上。
6.7超声波振荡器。
6.8旋转蒸发器。
6.9固相萃取装置。
7试料的制备与保存
7.1试料的制备
按GB/T 30891-2014附录B的要求制样。
a)取均质的供试样品,作为供试试料;
b)取均质的空白样品,作为空白试料;
c)取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料。
7.2试料的保存
-18℃以下保存。
8测定步骤
8.1提取
称取试料5.0 g(准确至±0.02 g),加内标工作液50μL,混匀,依次加水6 mL、氯化钠1 g,乙腈20 mL,3 000 r/min涡旋1 min,超声提取20 min,4 000 r/min离心10 min。取上清液,残渣加乙腈20 mL重复提取一次,合并上清液。40℃旋蒸浓缩至近干,加乙腈3 mL溶解残渣,备用。
8.2净化
固相萃取柱用乙腈3mL活化,取备用液过柱,控制流速不超过1mL/min,用乙腈3mL淋洗,加正已烷-丙酮溶液8mL洗脱。收集洗脱液,40℃氮吹至近干,准确加入乙腈2mL复溶,加C18吸附剂0.5g,以3000r/min涡旋1min,以4000r/min离心10min,取上清液过0.22μm滤膜,供液相色谱串联质谱仪测定。
8.3标准曲线的制备
准确移取标准工作液、内标工作液各适量,用乙腈稀释配制成二甲戊灵浓度分别为2.5μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20μg/L、50. 0μg/L、100.0μg/L,氘代二甲戊灵浓度均为25. 0μg/L的系列混合标准工作溶液,供液相色谱-串联质谱仪测定。使用时现用现配。以待测物与内标物峰面积比值为纵坐标、对应二甲戊灵浓度为横坐标,绘制标准工作曲线,求回归方程和相关系数。
8.4测定
8.4.1液相色谱参考条件
a)色谱柱:C18柱(100 mm×2. 1 mm,1. 7μm),或相当者;
b)柱温:40℃;
c)进样量:5μL;
d)流速:0.5 mL/min;
e)流动相:A为乙腈,B为甲酸水溶液(0.1%);
f)梯度洗脱条件见表1。
8.4.2质谱参考条件
a)离子源:电喷雾离子源(ESI源);
b)扫描方式:正离子扫描;
c)检测方式:多反应监测(MRM);
d)电喷雾电压:3000 V;
e)离子源温度:150℃;
f)脱溶剂气温度:450℃;
g)脱溶剂气、碰撞气、辅助气等气体,在使用前应调节其流量,使质谱灵敏度达到检测要求;
h)母离子、子离子、锥孔电压和碰撞能量等见表2。
8.4.3测定方法
a)定性方法
通过试样中各组分的保留时间、特征离子与相应的标准工作液中各组分的保留时间、特征离子相对照进行定性。在相同测试条件下,阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对偏差在±2.5%以内,且检测到的相对离子丰度,应当与浓度相当的校正标准品相对丰度一致。定量与定性碎片离子丰度比应符合表3的要求。
b)定量方法
将试样溶液和标准工作液在相同的色谱质谱条件下进行测定,作单点或多点校准,以色谱峰面积定量,内标法计算。标准工作液和试样液中目标物的响应值均应在仪器检测线性范围内。标准溶液的多反应监测谱图见附录A。
8.5空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作。
9结果计算和表述
试样中待测物残留量按标准由线或公式(1)计算。
式中:
X——试样中二甲戊灵残留量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);
As——标准工作液中二甲戊灵的峰面积;
A'is——标准工作液中氘代二甲戊灵的峰面积;
A——试样溶液中二甲戊灵的峰面积;
Ais——试样溶液中氘代二甲戊灵的峰面积;
Cs——标准工作液中二甲戊灵标准品浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);
C'is——标准工作液中氘代二甲戊灵标准品浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);
Cis——试样溶液中氘代二甲戊灵浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);
V——试样复溶溶液体积的数值,单位为毫升(mL);
m——供试试样质量的数值。单位为克(g)。
10检测方法的灵敏度、准确度和精密度
10.1灵敏度
二甲戊灵的检测限为1.0μg/kg,定量限为2.0μg/kg。
10.2准确度
二甲戊灵在2μg/kg~20μg/kg添加浓度的回收率为70%~120%。
10.3精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤15%。