中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4139-2015
出口水果蔬菜中乙萘酚残留量的测定
Determination of 2-naphthol residue in fruits and vegetables for export
1范围
本标准规定了植物源性食品中乙萘酚含量的高效液相色谱(HPLC)检测以及高效液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)检测和确证方法。
本标准适用于苹果、柑橘、小白菜、西红柿等食品中乙萘酚含量的测定和确证。
2规范性引用文件
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GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经乙腈提取,氨基柱净化,经高效液相色谱仪和高效液相色谱-质谱/质谱仪检测,外标法定量。
4试剂和材料
除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1乙腈:高效液相色谱级。
4.2甲醇:高效液相色谱级。
4.3甲苯。
4.4氯化钠。
4.5乙腈-甲苯溶液(3+1,体积比):量取300 mL乙腈(4.1)和100 mL甲苯(4.3),混匀后备用。
4.6乙腈溶液(5+5,体积比):准确量取50 mL乙腈(4.1)和50 mL水,混匀后备用。
4.7乙腈溶液(1 +9,体积比):准确量取10 mL乙腈(4.1)和90 mL水,混匀后备用。
4.8乙萘酚标准品:CAS NO.:135-19-3,纯度≥99.5%。
4.9标准储备溶液:精确称取适量的上述标准品,用甲醇溶解配制溶液浓度1mg/mL的标准储备溶液,-20℃下保存。
4.10标准中间溶液:用甲醇分别稀释标准储备液至终浓度约为10 mg/L,低于4℃下保存。
4.11基质标准工作液:吸取适量的标准中间溶液(4.10),用空白样品提取液配成适当浓度的混合标准工作溶液。现配现用。
4.12氨基柱:3 mL,500 mg或相当者。使用前用5 mL甲苯、5 mL乙腈和5 mL乙腈-甲苯溶液(4.5)活化。
4.13 0.22μm微孔滤膜,有机系。
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪,配有荧光检测器。
5.2高效液相色谱质谱/质谱仪,配电喷雾离子源(ESI)。
5.3电子天平:感量为0.01 g和0.01 mg。
5.4旋转蒸发仪。
5.5旋涡混匀器。
5.6氮吹仪。
5.7离心机:5 000 r/min。
5.8具塞塑料离心管:50mL。
6试样制备与保存
6.1试样制备
蔬菜、水果样品取可食部分切碎,用均质器匀浆后装入洁净容器内密封,并标明标记。
6.2试样的保存
将试样于-18℃以下保存。
7测定步骤
7.1提取
称取匀浆后的样品10.0g于50 ml离心管中,加入25 mL乙腈(4.1),再加入3 g氯化钠(4.4),涡旋振荡提取5min,5000r/min离心3min将上层有机相转移至旋蒸瓶中。用25mL(4.1)乙腈重复提取1次,合并有机相,在40℃水浴锅中旋转浓缩至约1 mL,向旋蒸瓶中加入5mL乙腈-甲苯(3+ 1)(4.5)溶液溶解残渣,待净化。
7.2净化
将上述溶液全部转移至活化后的氨基柱上,用鸡心瓶收集流出液,再每次用2 mL乙腈-甲苯(3+1)(4.5)溶液洗涤旋蒸瓶3次,并将洗涤液移入柱上,再用10 mL乙腈甲苯(3+ 1)(4.5)溶液洗脱化合物,收集全部流出液。并在40℃水浴锅中旋转浓缩至约1 mL,氮吹至干。HPLC法用1 mL乙腈溶液(4.6)或LC-MS/MS法用1 mL乙腈溶液(4.7)溶解残渣,过滤膜后供HPLC或LC-MS/MS测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
液相色谱条件如下:
a)色谱柱:C18柱,250 mm×4.6 mm(内径),5.0μm,或功能相当者;
b)流动相:乙腈和水(50+50,体积比),等体积洗脱;
c)流速:1 mL/min;
d)波长:激发波长λex=250 nm,发射波长λem=410 nm;
e)柱温:30℃;
f)进样量:20μL。
7.3.2液相色谱-质谱/质谱条件
液相色谱-质谱/质谱条件如下:
a)色谱柱:C18,150 mm×2.0(i.d.)mm,5.0μm,或功能相当者;
b)流动相:乙腈(B):2 mmol/L乙酸铵溶液(A),梯度洗脱程序见表1;
c)流速:0.30 mL/min或根据仪器条件优化;
d)柱温:40℃;
e)进样量:30μL;
f)离子源:电喷雾离子源;
g)离子化模式:负离子;
h)扫描方式:多反应监测(MRM);.
i)其他质谱条件:见附录A。
7.3.3定量测定
高效液相色谱法采用保留时间定性、峰面积定量,如果残留量超出标准曲线范围,应用定容溶液进行适当稀释。标准品的色谱图见附录B中的图B.1,乙萘酚的保留时间为8.0 min。
液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和基质标准工作容液,基质标准曲线法测定样液中的乙萘酚药物残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内,如果残留量超出标准曲线范围,应用空白样品提取液进行适当稀释。标准品的多反应监测色谱图见附录B中的图B.2,乙萘酚的保留时间为9.1min。
7.3.4定性测定
按照上述条件测定样液和标准溶液,如果样液中待测物的色谱峰保留时间与标准溶液一致,并且在扣除背景后的样液谱图中,所选择的离子对均出现,各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比,相对丰度偏差不超过表2的规定,则可判断样品中存在相应的被测物。
7.3.5空白实验
除不加试样外,均按上述测定步骤进行。
8结果计算
用色谱数据处理机或按照式(1)计算样品中待测物的残留量,计算结果需扣除空白。
式中:
x——试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
V——试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);
m——试样溶液所代表的质量,单位为克(g)。
9测定低限、回收率
9.1测定低限
高效液相色谱的测定低限为50μg/kg,高效液相色谱质谱/质谱的测定低限为10μg/kg。
9.2回收率
不同基质中添加深度水平下的回收率范围见表3和表4。