中华人民共和国农业行业标准
NY/T 3513-2019
生乳中硫氰酸根的测定 离子色谱法
Determination of thiocyanate in raw milk-lon chromatography
1范围
本标准规定了生乳中硫氰酸根测定的离子色谱法。
本标准适用于牛、羊、水牛、牦牛等不同奶畜(chu)生乳中硫氰酸根的测定。
本标准的检出限为0.25 mg/kg,定量限为0.75 mg/kg。
2规范性引用文件
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GB/T 6682分析实验室用水规格盒试验方法
3原理
试样用乙腈沉淀蛋白,上清液加水调节并经反相固相萃取柱净化后,用离于色谱分离,电导检测器检测。以保留时间定性,外标法定量。
4试剂或材料
除非另有规定,仅使用分析纯试剂。
4.1水,GB/T 6682,一级。
4.2乙腈(CH3CN)色谱纯。
4.3甲醇(CH3OH):色谱纯。
4.4丙酮(C3H6O):色谱纯。
4.5 50%氢氧化钠溶液(NaOH):色谱纯
4.6离子色谱淋洗液:根据仪器型号及色谱注选择和配制不同的淋洗液体系。
4.6. 1氢氧根系淋洗液由仪器自动在线生成或手工配制。
4.6.1. 1氢氧化钾淋洗液:由淋洗液自动电解发生器在线生成,浓度为45 mmol /I ~60 mmol/L。
4.6.1.2氢氧化钠淋洗液(45 mmol/L):取2.34ml 50%氢氧化钠溶液(4.5),用水稀释至1 000 mL,可通入氮气保护,以减缓碱性淋洗液吸收空气中的CO2而失效,缓慢播匀,室温下可放置7 d。
4.6.1.3氢氧化钠淋洗液(60 mmol/L) :取3.12 mL 50%氢氧化钠溶液(4.5) ,用水稀释至1000 mL,可通入氮气保护。以减缓碱性淋洗液吸收空气中的CO2而失效,缓慢摇习,室温下可放置7 d。
4.6.2碳酸盐系淋洗液(Na2CO3浓度为5 mmol/L,NaHCO3浓度为2 mmol/L,丙酮浓度为5%):准确称取0.5300g碳酸钠和0.1680g碳酸氢钠,分别溶于适量水中,转移至1000mL容量瓶,加入50mL丙酮,用水稀释定容,混匀。
4.7硫酸溶液(45 mmol/L) :移取2.45 mL浓硫酸,加入适量水中,并用水定容至1 000 mL,混匀。
4.8硫氰酸根标准储备溶液(1 000 mg/L) :将硫氰酸钠(NaSCN, CAS号; 540-72-7 ,纯度≥99.99%)于80℃烘箱内烘干2 h。准确称取干燥后的硫氰酸钠0.139 7 g,用水定容至100 mL,混匀。0℃~4℃保存,有效期为6个月。
4.9硫氰酸根标准中间溶液(10 mg/L):准确吸取1 mL硫氰酸根标准储备液(4.8),用水稀释至100mL,混匀。0℃~4℃保存,有效期为1个月。
4.10硫氰酸根标准系列溶液:分别准确移取硫氰酸根标准中间溶液(4.9)0 μL、10μL、20 μL、50μL、100μL、500μL和1 000μL用水定容至10 mL,混匀,得到浓度分别为0 mg/ L、0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.05mg/L、0.10 mg/L、0.50 mg/L和1.00 mg/L的硫氰酸根标准工作液。0℃~4℃保存,有效期为1个月。
5仪器设备
5.1离子色谱仪:配抑制器电导检测器。
5.2高速冷冻离心机:8 000 r/ min,4℃。
5.3天平:感量为0.1 mg、0.01 g。
5.4涡旋混匀器。
5.5移液器:100μL、1 mL。
5.6烘箱:(80±5)℃。
5.7过滤器:水系,0.22 μm。
5.8反相净化小柱,如OnGuard II RP柱(1.0 mL),或性能相当者。
6样品
采集的有代表性生乳样品可用硬质玻璃瓶成聚乙烯瓶盛放,样品采集后应尽快分析。著样品在0℃~6℃冷藏保存,冷藏时间不应超过48 h;若不能及时测定,应于-20℃冷冻保存,冷冻时间不应超过30 d,解冻温度不应超过60℃,解冻次数不应超过5次。冷藏、冷冻的样品需恢复至室温并摇匀,待测。
7试验步骤
7.1试样处理
称取试样4 g(精确至0. 01 g),用乙腈定容至10 mL,混匀1 min,静置20 min,离心5 min。准确移取1.00 mL上清液用水定容至10 mL并混匀,备用。同时做空白试验。
7.2 提取液净化
将反相净化小柱依次用5 mL甲醇和10 mL水活化,静置30 min,取上述溶液(7.1),过0.22μm滤膜并加载到活化好的净化反相柱上,弃去前3 mL流出液,收集滤液,待测。
7.3仪器参考条件
7.3.1仪器参考条件
7.3.1.1色谱柱:以OH-为流动相,并能使用梯度洗脱的、高容量的阴离子交换柱,如IonPac AS-16型色谱柱(4 mm×250 mm)和IonPac AG-16型保护柱(4 mm×50 mm),或性能相当的离子色谱柱。
7.3.1.2抑制器:ASRS-300 4mm阴离子抑制器,或性能相当的抑制器;外加水抑制模式,抑制器电流为112 mA~ 149 mA,外加水流量1.2 mL/min。
7.3.1.3淋洗液:氢氧根系淋洗液(4.6.1),流速为1.0 mL/ min,梯度淋洗。梯度淋洗条件参见表1。
7.3.1.4进样体积:100 μL。
7.3. 1.5 柱温: 30℃。
7.3.1.6电导池温度 :35℃。
7.3.2仪器参考条件
7.3.2.1色谱柱:碳酸盐淋洗体系的高容量阴离子交换柱,如Metrosep Anion Supp5-150(4 mm×150 mm)阴离子交换色谱柱和Metrosep Anion Guard(4 mm×50 mm)专用保护柱) ,或性能相当的离子色谱柱。
7. 3.2.2抑制器:MSM II型抑制器,抑制器再生液为硫酸溶液(4.7)。
7.3. 2.3淋洗液:碳酸盐系淋洗液(4.6. 2),流速为1.0 mL/min。
7.3.2.4进样体积:100μL。
7.3. 2.5 柱温: 30.0℃。
7.3.2.6 电导池温度:40.0℃。
7.4标准系列溶液和试样溶液分析
按选定的仪器参考条件Ⅰ或Ⅱ,对硫氰酸根标准系列溶液和试样溶液进行测定。不同淋洗液体系的标准溶液色谱图参见附录A。
7.5 定性
以硫氰酸根的保留时间定性,试样溶液中硫氰酸根的保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中硫氰酸根的保留时间一致,其相对偏差在±2.5%之内。
7.6 定量
以硫氰酸根的浓度为横坐标、色谱峰面积(或峰高)为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于0.99。试样溶液中待测物的浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范围,应将试样溶液用水溶液稀释n倍后,重新测定。
8试验数据处理
试样中硫氰酸根的含量以质量浓度ω计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算。
式中:
c——待测溶液从标准曲线上查得硫氰酸根的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L); .
V1——样品用乙腈提取时定容体积,单位为毫升(mL) ;
V2——移取离心后 上清液的体积,单位为毫升(mL);
V3——上清液稀释定容的体积,单位为毫升(mL);
m——试样质量,单位为克(g);
n——上机测定的试样溶液超出规定的范围后,进一步稀释的倍数。
计算结果保留至小数点后2位,用2次平行测定的算术平均值表示。
注:试样中测得的硫氰酸根离子含量乘以换算系数1.40,即得硫氰酸钠含量。
9精密度
在重复性条件下,2次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。