中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4350-2023
大米中2-乙酰基-1-吡咯啉的测定气相色谱-串联质谱法
Determination of 2-acetyl-1-pyrroline in rice by gas chromatography-
tandem mass spectrometry
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。
本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。
本文件起草单位：广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所、广东农科监测科技有限公司、广州广电计量检测股份有限公司。
本文件主要起草人：王旭、耿安静、高毓文、刘帅、陈光、唐雪妹、蓝梦哲、黄穗华、杨秀丽。
1范围
本文件规定了大米中2-乙酰基1-吡咯啉的气相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于大米中2-乙酰基1-吡咯啉的测定。
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义
4原理
试样经粉碎、无水乙醇超声提取后。经气相色谱-串联质谱仪检测；以保留时间及特征离子的相对丰度定性，外标法定量。
5试剂和材料
5.1试剂
无水乙醇(C2H6O，CAS号：64-17-5)：色谱纯。
5.2标准品
2-乙酰基1-吡咯啉(缩写2-AP)C6H9NO，CAS号：85213-22-5)：纯度≥95%。
5.3标准溶液配制
5.3.1 2-AP标准储备帘液(1000 mg/L)：准确称取2-AP标准品(5.2)10.0mg(精确至0.1 mg)于
10 mL容量瓶中，立即用无水乙醇(5.1)定容至刻度、放置手80℃冰箱，有效期6个月。
5.3.2 2-AP标准工作溶液（10.0mg/L）取2-AP标准储备溶液（5.3.1）0.05mL于50 mL容量瓶中，用无水乙醇(5.1)定容，放置于-20℃冰箱，有效期3个月。
5.3.3 2-AP基质标准曲线的配制：准确吸取2-AP标准工作溶液(5.3.2)0.05mL、0.25 mL、0.50 mL、
0.75mL、1.00mL、1.25mL干10mL的容量瓶中，加空白基质溶液定容至刻度，配得浓度分别为0.05 mg/L、0.25 mg/L、0.50mg/L、0.75 mg、1.00 mg/L、1.25mg/L的系列标准溶液，现用现配。标准工作溶液的浓度亦可根据实际情况自行调整。
5.4材料
微孔滤膜(有机相)：直径13 mm、孔径0.22μm。
6仪器和设备
6.1气相色谱-串联质谱联用仪：配有电子轰击源(EI)。
6.2分析天平：感量0.0001 g和0.01 g。
6.3高速冷冻离心机。
6.4超声波发生器。
6.5涡旋振荡器。
6.6粉碎机。
6.7标准网筛：0.25 mm。
7试样制备
取大米样品250 g，粉碎过标准网筛(6.7)后于样品瓶中，宜用封口膜封口后，4℃条件下保存。
8分析步骤
8.1样品前处理
称取1 g试样(精确至0.01 g)于10 mL离心管中，加入无水乙醇(5.1)1.5 mL，立即拧紧离心管螺帽，涡旋混匀，于68℃水浴超声2 h后，10 000 r/min、4℃离心10 min，取上清液，过微孔滤膜(5.4)，上机测定。
8.2测定
8.2.1仪器参考条件
8.2.1.1气相色谱参考条件
a)色谱柱：固定相为5%苯基-95%二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱，30m×0.25mm×0.25μm，或性能相当者；
b)色谱柱温度：初温45℃保持1 min，以8℃/min升温至100℃，再以50℃/min升温至250℃，
保持1 min；
c)载气：氦气，纯度≥99. 999%，流速1.2 mL/min；
d)进样口温度：250℃；
e)进样量：1μL；
f)进样方式：不分流进样。
8.2.1.2质谱参考条件
a)电子轰击源：70 eV；
b)离子源温度：250℃；
c)接口温度：250℃；
d)溶剂延迟：5.5 min；
e)采集方式：多反应监测(MRM)；
f)检测方式：MRM，多反应监测条件见表1。
8.2.2标准工作曲线绘制
将系列基质标准溶液(5.3. 3)分别注入气相色谱串联质谱仪中，以2-AP的定量离子的峰面积为纵坐标，以对应的系列基质标准溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。
8.2.3定性分析
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致并且在扣除背景后的样品质谱图中，2-AP的质谱定量和定性离子均出现，而且同一检测批次，样品中2-AP的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比较，其允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在2-AP。
8.2.4定量分析
采用外标法定量，将试样待测液注入气相色谱质谱联用仪中，得到相应的2-AP的峰面积，根据标准曲线得到待测液中2-AP的浓度。试样待测液中的被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，若试样待测液的质量浓度超过曲线上限浓度，使用空白基质提取溶液稀释后测定。上述条件下，2-AP的多反应监测(MRM)色谱图和定性离子质谱图见附录A。
8.3空白试验
采用空白基质，按照8.1~8.2的规定的操作。
9结果计算
试样中2-AP的含量以质量分数ω计，按公式(1)计算。
式中：
ω——试样中2-AP质量分数的数值，单位为毫克每千克(mg/kg)；
ρ——基质标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L)；
ρ0——通过标准工作曲线计算得空白基质的浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L)；
V——试验溶液的提取体积的数值，单位为毫升(mL)；
f——试样稀释倍数；
m——试样质量的数值，单位为克(g)。
计算结果用重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示。
10精密度和灵敏度
10.1精密度
在重复性条件下获得的2次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
10.2灵敏度
方法检出限为0.025 mg/kg，方法定量限为0. 075 mg/kg。
