中华人民共和国国家标准
GB 1903.33-2022
食品安全国家标准
食品营养强化剂5'-单磷酸胞苷(5'-CMP)
1范围
本标准适用于以酵母核糖核酸(RNA)为原料，用核酸酶酶解生产制得的食品营养强化剂5'-单磷酸胞苷。
2化学名称、分子式、结构式和相对分子质量
2.1化学名称
5'-单磷酸胞苷(5'胞苷酸、5'-CMP)
2.2分子式
C9H14N3O8P
2.3结构式
2.4相对分子质量
323.20(按2018年国际相对原子质量)
3技术要求
3.1感官要求
感官要求应符合表1的规定。
3.2理化指标
理化指标应符合表2的规定。
3.3微生物指标
微生物指标应符合表3的规定。
附录A
检验方法
A.1一般规定
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.2鉴别实验
按GB/T 6040规定方法执行，产品红外光谱应与标准品红外光谱(标准品红外光谱图参见附录B)一致。
A.3 5'-单磷酸胞苷(C9H14N3O8P)(以干基计)的测定
A.3.1试剂和材料
A.3.1.1水：符合GB/T 6682-2008的一级水。
A.3.1.2 2 mol/L氢氧化钠溶液：称取40 g固体氢氧化钠于500 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀。
A.3.1.3 0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液：称取6.804 5 g磷酸二氢钾(KH2PO4)于1 L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度.摇匀后用0.45μm微孔膜过滤。使用前用超声波超声脱气30 min。
A.3.1.4 5'-单磷酸胞苷标准物质(纯度≥98%)。
A.3.1.5 5'-单磷酸胞苷标准储备液：精确称取5'-单磷酸胞苷标准物质100.0 mg于50 mL容量瓶中，用水溶解并加入2 mol/L氢氧化钠溶液1滴~2滴助溶，定容至刻度，混合均匀，密封后贮于4℃冰箱中备用。
A.3.1.6 5'-单磷酸胞苷标准使用液：准确吸取1.0 mL 5'-单磷酸胞苷标准储备液于50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。进样前用0.45μm微孔膜过滤。
A.3.2仪器和设备
A.3.2.1高效液相色谱仪(紫外检测器)。
A.3.2.2分析天平(感量0.000 1 g)。
A.3.3参考液相色谱条件
A.3.3.1色谱柱：C18(4.6 mm×250 mm，5μm)或相当型号色谱柱。
A.3.3.2流动相：0.05 mol/L KH2PO4溶液+甲醇=95+5。
A.3.3.3进样量：20μL。
A.3.3.4流速：0.8 mL/min。
A.3.3.5紫外检测波长：254 nm。
A.3.3.6柱温箱温度：25℃。
A.3.4试样制备
样品储备液：精确称取样品100.0 mg于50 mL容量瓶中，用水溶解并加入2 mol/L氢氧化钠溶液1滴~2滴助溶，定容至刻度，混合均匀。
样品使用液：准确吸取1.0 mL样品储备液于50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。进样前用0.45μm微孔膜过滤。
A.3.5测定
按A.3.3的色谱条件将5'-单磷酸胞苷标准使用液和样品使用液分别进样。根据标准品的保留时间，确定样品5'-单磷酸胞苷的色谱峰。根据样品的峰面积，以外标法计算样品中5'单磷酸胞苷的含量。
A.3.6结果计算
5'-单磷酸胞苷含量(以干基计)的质量分数w1按式(A.1)计算。
式中：
A——样品使用液5'-单磷酸胞苷的峰面积；
ms——标准物质5'-单磷酸胞苷的质量，单位为克(g)；
r——标准物质5' -单磷酸胞苷的水分，%；
As——标准使用液5'-单磷酸胞苷的峰面积；
m——样品5'-单磷酸胞苷的质量，单位为克(g)；
ri——样品5'-单磷酸胞苷的水分，%。
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过0.5%。
A.4紫外吸光度比值的测定
A.4.1试剂和材料
盐酸溶液：0.01 mol/L。
A.4.2仪器和设备
紫外分光光度计。
A.4.3分析步骤
吸取样品储备液(A.3.4)1.0 mL于100 mL容量瓶，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀。用紫外分光光度计分别测定250nm、260nm、280nm波长处的吸光度。
用盐酸溶液作空白对照。
A.4.4结果计算
250nm吸光度和260nm吸光度的比值X1按式(A.2)计算。
式中：
A250——250nm处样品的吸光度；
A260——260nm处样品的吸光度。
在波长280 nm和260 nm处的吸光度比值X2按式(A.3)计算。
式中：
A280——280 nm处样品的吸光度；
A260——260nm处样品的吸光度。
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过2%。
A.5 pH的测定
A.5.1仪器和设备
A.5.1.1酸度计(分度值0.01 pH)。
A.5.1.2分析天平(感量0.01 g)。
A.5.1.3超声波清洗器。
A.5.2分析步骤
称取1.0g样品于250 mL锥形瓶中，加100 mL水，在超声波清洗器中超声使之完全溶解，冷却至室温，然后用酸度计测定溶液的pH。
同一样品两次测定值之差不应超过20%。
