中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5638-2023
冰葡萄酒中20种醛酮类物质的测定
气相色谱-质谱/质谱法
Determination of 20 kinds of aldehydes and ketones in ice wine-
Gas chromatography-tandem mass spectrometry method
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
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本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中国海关科学技术研究中心、中国肉类食品综合研究中心、杭州海关技术中心、北京中认检测技术服务有限公司。
本文件主要起草人：梁娜娜、古瑾、韩深、刘萤、王佩玥、谢文、刘扬。
1范围
本文件规定了冰葡萄酒中(E)-2己烯醛、(E)-2-庚烯醛、(E)-2-辛烯醛、(E,E)-2,4-庚二烯醛、2-甲基丙醛、3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基丙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、辛醛、癸醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、2,3-丁二酮、1-辛烯-3-酮、2-壬酮的气相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于冰葡萄酒中(E)-2己烯醛、(E)-2-庚烯醛、(E)-2-辛烯醛、(E,E)-2,4-庚二烯醛、2-甲基丙醛、3-甲基丁醛、苯乙醛、甲硫基丙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、辛醛、癸醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、2,3-丁二酮、1-辛烯-3-酮、2-壬酮的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 33087仪器分析用高纯水规格及试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
冰葡萄酒ice wines
将葡萄推迟采收，当气温低于-7℃使葡萄在树枝上保持一定时间，结冰，在结冰状态下压榨，发酵，酿制而成的葡萄酒（在生产过程中不允许外加糖源）。
4方法提要
试样中的待测物与邻五氟苯甲基羟胺发生衍生反应后，经固相萃取净化后用气相色谱-三重四级杆质谱分析检测，内标法定量。
5试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水为符合GB/T 33087规定的仪器分析用高纯水。
5.1试剂
5.1.1甲醇（CH3OH，CAS号67-56-1）。
5.1.2乙醇（C2H5OH，CAS号64-17-5）。
5.1.3二氯甲烷（CH2Cl2，CAS号75-09-2）。
5.1.4对氟苯甲醛（C7H5FO，CAS号459-57-4）：纯度≥98%。
5.1.5硫酸（H2SO4，CAS号7664-93-9）：分析纯。
5.1.6酒石酸氢钾（KHC4H4O6，CAS号868-14-1）：分析纯。
5.1.7酒石酸（C4H6O6，CAS号133-37-9）：分析纯。
5.1.8硫酸铵[（NH4）2SO4，CAS号7783-20-2]：分析纯。
5.1.9邻五氟苯甲基羟胺盐酸盐（C7H4NOF5·HCl，CAS号57981-02-9）：纯度≥98%。
5.1.10无水硫酸钠（Na2SO4，CAS号7757-82-6）：分析纯，用前在650℃灼烧4 h，贮于干燥器中，冷却后备用。
5.2标准品
20种醛酮类标准物质：丙醛、2-异丁醛、3-甲基丁醛、2,3-丁二酮、己醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、苯乙醛、丁醛、戊醛、（E）-2-己烯醛、1-辛烯-3-酮、3-甲硫基丙醛、（E）-2-庚烯醛、辛醛、2-壬酮、（E,E）-2,4-庚二烯醛、(E)-2-辛烯醛、癸醛，纯度≥95%，化学式、CAS号见附录A。
5.3溶液配制
5.3.1饱和酒石酸氢钾溶液（0.034 mol/L）：准确称取酒石酸氢钾（5.1.6）640 mg（精确至0.1 mg），
用高纯水溶解并定容至100 mL。
5.3.2葡萄酒模拟溶液：取13 mL乙醇（5.1.2）和87 mL的饱和酒石酸氢钾溶液（5.3.1）混合均匀，用酒石酸调节pH至3.3。
5.3.3邻五氟苯甲基羟胺衍生化试剂（20 g/L）：准确称取邻五氟苯甲基羟胺（5.1.9）200 mg（精确至0.1 mg），用高纯水溶解并定容至10 mL。
5.3.4硫酸溶液（0.05 mol/L）：取2.70 mL硫酸（5.1.5），用高纯水稀释后定容至1 L。
5.3.5对氟苯甲醛溶液（15 mg/L）：准确称取对氟苯甲醛标准品（5.1.4）15 mg（精确至0.1 mg），用乙醇（5.1.2）溶解并定容至10 mL，得到1 500 mg/L的对氟苯甲醛溶液，避光-20℃储存，有效期6个月。取100μL1 500 mg/L的对氟苯甲醛溶液，用乙醇（5.1.2）定容至10 mL，避光4℃储存，有效期3个月。
5.3.6标准储备溶液：分别称取适量各种醛酮标准品，用乙醇（5.1.2）溶解并定容至10 mL，避光-20℃储存，有效期6个月。
5.3.7标准工作溶液的母液配制：将20种醛酮化合物分成A、B两组，A组包括：丙醛、2-异丁醛、3-甲基丁醛、2,3-丁二酮、己醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、苯乙醛。B组包括：丁醛、戊醛、（E）-2-己烯醛、1-辛烯-3-酮、3-甲硫基丙醛、(E)-2-庚烯醛、辛醛、2-壬酮、（E, E）-2,4-庚二烯醛、(E)-2-辛烯醛、癸醛。分别吸取适量A组9种醛酮化合物标准储备液，用乙醇（5.1.2）配制为10 mg/L的混合母液。分别吸取适量B组11种醛酮化合物标准储备液，用乙醇（5.1.2）配制为1.0 mg/L的混合母液，现用现配。
5.4材料
5.4.1固相萃取柱（官能化聚苯乙烯/二乙烯苯）：12 mL，1.0 g或相当者。
5.4.2离心管：50 mL。
5.4.3玻璃烧杯：200 mL。
5.4.4量筒：50 mL。
5.4.5刻度浓缩瓶：25 mL。
6仪器和设备
6.1气相色谱三重四级杆质谱仪器：配有电子轰击源（EI）。
6.2分析天平：感量为0.000 1 g。
6.3高速离心机：最大转速≥10 000 r/min。
6.4磁力搅拌器。
6.5涡旋振荡器。
6.6移液器：0.5μL~10μL，20μL~ 200μL，100μL~ 1 000μL。
6.7氮气吹干仪。
6.8尼龙微孔滤膜：0.22μm。
7试样制备
将酒样摇匀后，倒取约50 mL样品于洁净的玻璃烧杯中。
8分析步骤
8.1衍生化
量取20 mL样品于离心管中，加入5μL 15 mg/L对氟苯甲醛溶液（5.3.5）作为内标，混匀后加入1 mL 20 g/L邻五氟苯甲基羟胺衍生化试剂（5.3.3），磁力搅拌15 min，加入3 g硫酸铵后充分摇匀。
8.2净化
8.2.1将固相萃取柱放入固定架上，加样前先用10 mL二氯甲烷预洗柱，依次用10 mL甲醇、10 mL高纯水活化萃取柱，待用。
8.2.2将衍生液全部转移至萃取柱上，用10 mL葡萄酒模拟溶液（5.3.2）淋洗萃取柱，再用10 mL硫酸溶液（5.3.4）洗涤萃取柱。用15 mL二氯甲烷分三次洗脱萃取柱，并收集所有洗脱液至离心管中，加入1.5 g无水硫酸钠去除水分。转移二氯甲烷层于刻度浓缩瓶中进行氮吹，浓缩至1 mL后过微孔滤膜，待测。
8.3醛酮衍生物标准工作溶液的制备
分别移取适量的A、B两组母液（5.3.7）共同置于20 mL容量瓶中，用葡萄酒模拟溶液（5.3.2）定容至刻度，得到标准工作溶液，分别配制得到A组浓度梯度为：2μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L的混合标准溶液，对应的B组浓度梯度为：0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L。以下步骤按照按8.1和8.2与试样同时处理。
8.4空白试验
量取相同体积的水代替样品，以下步骤按8.1和8.2与试样同时处理。
8.5测定
8.5.1仪器参考条件
仪器参考条件如下：
a）色谱柱：HP-5MS UI（30 m×250μm×0.25μm）石英毛细管柱或相当者；
b）色谱柱温度程序：40℃保持1 min；然后以8℃/min升温至90℃，保持0.1 min；再以4℃/min升至180℃，保持2 min，再以30℃/min升至230℃，保持1 min；
c）载气：氦气，纯度≥99.999%，流速：1.0 mL/min；
d）进样口温度：250℃；
e）进样量：1μL；
f）进样方式：无分流进样，1.5 min后打开分流阀和隔垫吹扫阀；
g）电子轰击源：70 eV；
h）离子源温度：230℃；
i）接口温度：250℃；
j）每种化合物与邻五氟苯甲基羟胺的衍生物的保留时间、定量离子对、定性离子对，见附录A。
8.5.2定性测定
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检测的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，定性离子对的相对丰度（是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或者采用增加其他确证离子的方式来确证。
8.5.3定量测量
本方法采用内标法定量测定，内标物为对氟苯甲醛。选取与被测样品响应值接近的标准溶液，醛酮类物质的邻五氟苯甲基羟胺衍生物的多反应监测（MRM）色谱图见附录B。
9结果计算和表述
试样中各种醛酮类物质的含量由色谱数据处理软件或按公式（1）计算获得。
式中：
X——试样溶液中醛酮类物质的含量，单位为微克每升（μg/L）；
cs——标准溶液中醛酮类物质的浓度，单位为微克每升（μg/L）；
A——试样溶液中醛酮类物质的峰面积；
As——标准溶液中醛酮类物质的峰面积；
ci——试样溶液中内标物的浓度，单位为微克每升（μg/L）；
csi——标准溶液中内标物的浓度，单位为微克每升（μg/L）；
Asi——标准溶液中内标物的峰面积；
Ai——试样溶液中内标物的峰面积；
V——最终样液定容体积，单位为毫升（mL）；
ʋ——最终试样溶液所代表试样的体积，单位为毫升（mL）
测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。
10定量限和回收率
10.1定量限
冰葡萄酒中丙醛、2-异丁醛、3-甲基丁醛、2,3-丁二酮、己醛、糠醛、5-甲基糠醛、苯甲醛、苯乙醛的定量限为2.00μg/L；丁醛、戊醛、(E)-2-己烯醛、1-辛烯-3-酮、3-甲硫基丙醛、(E)-2-庚烯醛、辛醛、2-壬酮、（E，E）-2,4-庚二烯醛、(E)-2-辛烯醛、癸醛的定量限为0.20μg/L。
10.2精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的15%。
10.3回收率
冰葡萄酒中20种醛酮类物质的添加水平及回收率见附录C。
